折疊濾芯微濾膜酶活性的測(cè)定

常常利用同位素示蹤法來(lái)測(cè)定參與生物高分子合成的酶活性，即利用標(biāo)記小分了底物和酶保溫，然后把放射性的小發(fā)子(底物)和放射性大分子(產(chǎn)物)分開(kāi)。這一般用酸或有機(jī)溶劑沉淀來(lái)完成(沉淀蛋白質(zhì)一般用三氯醋酸，沉淀核酸常用過(guò)氯酸)。這里在，用微孔濾膜過(guò)濾可以簡(jiǎn)便快速地把沉淀產(chǎn)物完全收集在濾膜上，然后充分洗滌除去未摻入的小分子放射性底物，最后干燥濾膜，直接溶于閃爍液中進(jìn)行均相測(cè)定或懸浮在閃爍液中進(jìn)行非均相測(cè)定。降解大分子的酶也可以用微孔濾膜技術(shù)來(lái)測(cè)定活性。例如測(cè)定DNA內(nèi)切酶活性時(shí)，用酸沉淀法不夠滿(mǎn)意，因?yàn)楫a(chǎn)物中也包括較大分子的寡核苷酸，而它也和酸不溶性底物一起沉淀出來(lái)，為了精確測(cè)定核酸內(nèi)切酶活性，酶反應(yīng)混合物直接用Schleicher&Schuell廠生產(chǎn)的A型硝酸纖維素酯濾膜過(guò)濾，它只滯留大分子而不滯留寡核苷酸，能把產(chǎn)物和底物分離得比較徹底，結(jié)果是比較滿(mǎn)意的。

在原則上，凡是能把一種放射性前體轉(zhuǎn)移或摻入到一種能選擇性沉淀形式產(chǎn)物的酶中，都能用微孔濾膜技術(shù)測(cè)定活性。